Instruments et méthodes de la recherche scientifique

Séparation de pigments par chromatographie sur support solide

Principe

La chromatographie sur support solide est une technique physique de séparation de substances présentes dans un mélange ; elle utilise la migration d’un liquide (éluant) sur un support solide (papier, couche mince d'acétate de cellulose…). Les substances solubles dans l'éluant migrent sur le support à une vitesse qui dépend de leurs propriétés physico-chimiques (masse, polarité, solubilité...).

La chromatographie peut également permettre d'identifier des susbtances.

Cet exemple est emprunté à la Physique ; vous avez peut-être réalisé cette expérience en classe.

Source : www.pccl.fr/physique_chimie_college_lycee (version flash)

Protocole : chromatographie sur papier

Les produits constituant l'éluant sont toxiques et facilement inflammable. Les manipulations se font donc sous hotte aspirante.

  1. Préparer l'éprouvette 5 minutes à l'avance pour saturer son atmosphère en éluant.
  2. Écraser directement le matériel biologique sur le papier Wattman. Répéter plusieurs fois l’opération (la tache de pigments doit être aussi concentrée que possible).
  3. Durée de la migration : 20 à 30 minutes.

Précautions

  • Tenir le papier par les bords sans poser les doigts sur la zone de migration.
  • Le dépôt de pigments ne doit pas être immergé dans l'éluant mais être le plus près possible de celui-ci.
  • Le papier doit tremper d’environ un demi centimètre dans l'éluant.

Résultats

À partir de chlorophylle brute, on observe la séparation et la migration de quatre pigments :

La "chlorophylle brute" n'est pas un pigment mais un mélange de pigments : c'est l'ensemble des pigments contenus dans une feuille.