La pomme de terre contient de l'amidon, fabriqué par les cellules des tubercules grâce à une enzyme qui catalyse la formation de liaisons entre les molécules de glucose successives.
- On veut montrer que l'enzyme des cellules végétales utilise préférentiellement le glucose-1-phosphate comme substrat.
Notions évoquées dans ce dossier
- la spécificité de substrat d'une enzyme
Source : https://www.thoughtco.com/amyloplast-definition-4142136
L'enzyme est l'amylosynthétase. On dispose de trois glucides : le glucose-1-phosphate, le glucose et le saccharose.
- voir les modèles 3D de ces glucides sur libmol.org
Matériel
| Sur le bureau du Professeur | Sur votre paillasse |
|---|---|
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Le Lugol est une substance toxique (irritante). Protégez-vous avec les lunettes et les gants.
NB : lire le protocole en entier avant de commencer toute manipulation.
- Identifier les tubes à essai (1 à 6, T et E), les plaques de coloration (dates des prélèvements et n° des tubes 1 à 6) et les pipettes (noms des tubes).
- Remplir les tubes en suivant le tableau ci-dessous :
| Tube n° | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | T | E |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Verser dans le tube |
eau distillée |
enzyme (E) |
substrats (S) |
eau distillée |
enzyme (E) |
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filtrat de pomme de terre |
solution de glucose-1-phosphate |
solution de saccharose |
solution de glucose |
solution de glucose-1-phosphate |
filtrat de pomme de terre |
|||
Volume |
1 mL |
10 mL |
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Rôle |
témoins |
tests |
(réserve) |
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- Placer les tubes au bain marie à 25°C ± 2°.
- Après avoir vérifié que le contenu des tubes est à température, ajouter le plus rapidement possible 1 mL des tubes T ou E dans les tubes 1 à 6 :
| Tube n° | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
|---|---|---|---|---|---|---|
Le tube contient déjà : |
eau distillée |
filtrat de pomme de terre (E) |
solution de glucose-1-phosphate |
solution de saccharose |
solution de glucose |
solution de glucose-1-phosphate |
Ajouter 1 mL du tube : |
T (eau distillée) |
E (enzyme) |
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Rôle |
témoins |
tests |
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- Déclencher immédiatement le chronomètre (temps t0).
- Prélever une goutte dans chaque tube toutes les 3 minutes pendant 12 minutes et la placer dans le puits correspondant sur la plaque. NB : utiliser une pipette différente pour chaque tube.
- Verser une goutte de Lugol dans le puit que vous venez de remplir, pour vérifier s’il y a eu synthèse d’amidon ou non.
- Noter les résultats obtenus (pas de coloration : - ; coloration : + ou ++ selon son intensité).
- Mettre en évidence la présence éventuelle de produit dans les tubes à la fin de l'expérience (avec la Liqueur de Fehling ou des bandelettes réactives).
- À la fin de l'expérience, rincer et ranger le matériel et la paillasse.
Piste d'exploitation des résultats
- Quel est le substrat ? L'enzyme ? Les produits ? Les réactifs colorés ?
- De l'amidon a-t-il été produit à partir de tous les glucides utilisés (glucose, glucose-1-phosphate, saccharose) ? Qu'est-ce que cela montre sur le fonctionnement de l'enzyme ?
Source (optimum thermique de l'enzyme) : "Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, Volume 68"