Les enzymes, des biomolécules catalytiques

Hydrolyse enzymatique de l'amidon

NB : lire le protocole en entier avant de commencer toute manipulation.

Renseigner, si besoin, les puits de la plaque de titration (numéro et durée), numéroter les tubes à essai et autant de pipettes.
Remplir les tubes selon le tableau ci-dessous, à l'exception de l'enzyme qui sera ajoutée à l'étape 5 :

Tube n°	1	2	3	4	5
empois d'amidon = substrat (mL)	10	10	10	10	10
eau (mL)	-	1	-	1	-
température (°C)	35	35	5	5	35
solution d'amylase = enzyme	normale	-	normale	-	chauffée au préalable

Vérifier que le contenu des tubes soit à température.
Faire un premier prélèvement à t₀ et ajouter quelques gouttes de Lugol. Vérifier la conformité des résultats obtenus.

La réaction peut être très rapide (quelques minutes), par conséquent il ne faut passer à l'étape suivante que lorsque vous êtes sûr d'avoir tout préparé pour la suite du protocole.

Ajouter 1 mL de solution d'amylase (normale ou préalablement chauffée) dans les tubes 1, 3 et 5 et déclencher le chronomètre.

Au bout d'une minute, prélever quelques gouttes dans chacun des tubes et verser dans les puits correspondants de la plaque.
Ajouter une goutte de Lugol.
Toutes les minutes, refaire les prélèvements et tests jusqu'à obtention d'un résultat (et au moins 5 tests). Rincer soigneusement les pipettes à l'eau entre chaque prélèvement.
Mettre en évidence la présence éventuelle de produit dans les tubes à la fin de l'expérience (avec la Liqueur de Fehling ou des bandelettes réactives).
Rincer le matériel et ranger la paillasse.

Pistes d'exploitation des résultats